蛋白提取

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。一般来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。

MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。 它们仅供参考。

• 从细胞中提取蛋白质

1. 细胞悬液在 4 ℃下，2000 xg 离心 5-7 分钟。在试管底部收集细胞，弃去上清。

2. 加入冰冷的 PBS，4 ℃下，2000 xg 离心 5-7 分钟洗涤细胞。

3. 在细胞颗粒中加入冰冷的裂解缓冲液，加入适量蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂（现配现用），超声破碎或在微离心管中 4 ℃ 搅拌 30 分钟。

4. 4 ℃, 16000 xg 离心 20 分钟。弃去沉淀，在新管收集上清液，冰上放置。

• 从组织中提取蛋白质

1. 在冰上解剖感兴趣的组织。将组织转移到微型离心管中，浸泡在液氮中快速冷冻。

2. 每 5 mg 的组织，加入 300 µL 的冰冷裂解缓冲液，加入适量蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂（现配现用）并用电动高速搅拌器均质化。匀浆过程中加入 300-600 µL 裂解缓冲液。

3. 在 4 ℃ 下搅拌 2 小时。

4. 4 ℃, 16000 xg 离心 20 分钟。弃去沉淀，在新管收集上清液，冰上放置。

取少量裂解液进行蛋白估计试验。

通过与标准品的比较，确定未知样品的蛋白质浓度，确保将标准品稀释到与未知样品相同的缓冲液中。蛋白质含量估计可使用考马斯蛋白测定试剂，BCA 试验，或 280 nm 吸光度。

将适当体积的裂解物转移到微离心管中，使所有样品含有相同的总蛋白浓度。

加入足够的冷冻裂解缓冲液，使所有裂解液达到相同的体积。

1. 整个过程应在低温或冰上进行。

2. RIPA 裂解液可以提取全蛋白，如果要提取特定的蛋白质，可以通过专门设计的试剂盒提取这些蛋白质。

3. 若要进行 SDS 变性电泳，可以在蛋白提取的同时加入 SDS 使全蛋白和蛋白酶变性。