免疫荧光实验方法

免疫荧光 (Immunofluorescence, IF) 技术，是根据抗原-抗体反应的原理，用荧光抗体 (抗原) 作为探针检查组织或细胞内相应的抗原 (抗体)，在组织或细胞中形成带有荧光的抗原-抗体复合物，达到检测、监测、分析甚至纯化蛋白质的目的。
用于蛋白质标记的荧光探针类型包括花青素、罗丹明、荧光素、生物蛋白如 GFP 和量子点。荧光探针可以通过菁染料，罗丹明染料连接目标蛋白，其中荧光素通过连接目标蛋白的半胱氨酸，赖氨酸，酪氨酸或 N 端完成标记。
根据不同的结果，最终可以使用荧光显微镜等技术来量化和监测目标蛋白质，流式细胞术来分选蛋白质，甚至使用带有多个标记蛋白质的荧光活细胞成像来监测活细胞^[1][2]。

MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。 它们仅供参考。

1. 融蜡：72℃ 干燥 1-2 小时。

2. 脱蜡：二甲苯 20 分钟。

3. 脱水：无水乙醇 3 分钟，95% 乙醇 3 分钟，75% 乙醇 3 分钟，TBS 3 分钟 (三次)。

4. 抗原修复：浸没于抗原修复缓冲液，微波炉加热 4 分钟后放至室温，TBS 3 分钟 (三次)。

5. 透明：Triton X-100 20 分钟。

6. 封闭：封闭液封闭 30 分钟。

7. 一抗孵育：4℃ 过夜孵育。

8. 洗涤：TBST 5 分钟 (三次)。

9. 二抗孵育：室温孵育 2 小时。

10. 洗涤：TBST 5 分钟 (三次)，TBS 5 分钟 (一次)。

11. 封片：使用含有抗淬灭剂的封片剂 (根据实验需求是否加 DAPI 进行核染色)。

1. 关于透明，如果切片比较薄的话，也可不透膜。但如果是研究细胞膜表面的蛋白，那就不要透膜了。

2. 抗原修复过程中，微波炉加热时注意防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。修复液和修复强度根据组织来确定。