5(6)-TAMRA SE  (Synonyms: 5(6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯; 5(6)-Carboxytetramethylrhodamine N-succinimidyl ester)

5(6)-TAMRA SE is a fluorescent dye that emits red fluorescence. 5(6)-TAMRA SE binds to oligonucleotides and is used in DNA sequencing. 5(6)-TAMRA SE can be used in cancer research (Ex/Em = 565/580 nm)^[1][2][3][4].

原液制备
1. 蛋白准备
为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体) 浓度配制为 2 mg/mL。
1) 蛋白溶液 pH 值应为 8.5±0.5，若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。
2) 若蛋白浓度低于 2 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
3) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的缓冲液中，否则会影响标记效率。
2. 染料准备
将无水 DMSO 稀释 5(6)-TAMRA SE 染料，制成 10 mM 储备溶液。通过玻璃管或旋涡充分混合。
3. 染料工作液用量计算
标记反应所需的 5(6)-TAMRA SE 染料用量取决于要标记蛋白的用量，5(6)-TAMRA SE 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg 5(6)-TAMRA SE 染料，则所需 5(6)-TAMRA SE 体积为 3.53 μL，详细计算流程如下：
1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) ×mL (IgG)/MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10^-6 mmol
2) mmol (5(6)-TAMRA SE) = mmol (IgG) ×10 =6.7×10^-6 mmol×10 = 6.7×10^-5 mmol
3) μL (5(6)-TAMRA SE) = mmol (5(6)-TAMRA SE) ×MW (5(6)-TAMRA SE)/mg/μL (5(6)-TAMRA SE) = 6.7×10^-5 mmol× 527.53 mg/mmol/0.01 mg/μL =3.53 μL (5(6)-TAMRA SE)


使用方法
1. 标记反应
1) 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL 5(6)-TAMRA SE 染料缓慢加入到 0.5 mL 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。
2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10–15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
2. 蛋白纯化脱盐
以下方案是使用 SepHadex G-25 柱纯化染料蛋白偶联物为例。
1) 按照生产说明书制备 SepHadex G-25 柱。
2) 将反应混合物装入 SepHadex G-25 色谱柱顶部。
3) 当样品运行到顶部树脂表面下方时，立即加入 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需样品中加入更多的 PBS (pH 7.2-7.4),完成柱纯化。结合含有所需要的染料-蛋白质缀合物的组分。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

527.53

C₂₉H₂₅N₃O₇

246256-50-8

固体

Purple to purplish red

580

565

5(6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, protect from light, stored under nitrogen

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)

* 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。

• [1]. Fuller ME, et al. Application of a vital fluorescent staining method for simultaneous, near-real-time concentration monitoring of two bacterial strains in an Atlantic coastal plain aquifer in Oyster, Virginia. Appl Environ Microbiol. 2004 Mar;70(3):1680-7.  [Content Brief]

  [2]. Brunner A, et al. Labelling peptides with fluorescent probes for incorporation into degradable polymers. Eur J Pharm Biopharm. 1998 May;45(3):265-73.  [Content Brief]

  [3]. Jiang M, et al. Design and synthesis of new acid cleavable linkers for DNA sequencing by synthesis. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2014;33(12):774-85.  [Content Brief]

  [4]. Wendland M, et al. CCR9 is a homing receptor for plasmacytoid dendritic cells to the small intestine. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Apr 10;104(15):6347-52.  [Content Brief]