HP PolyFast Transfection Reagent 

HP PolyFast 转染试剂

MCE HP PolyFast 转染试剂是一种阳离子高分子聚合物的新型转染试剂，适用于 DNA、RNA 的转染。

转染原理为：带正电的高分子聚合物与核酸带负电的磷酸基团结合形成带正电的复合物后，与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用并通过内吞作用进入细胞，随后在胞质中释放，实现外源核酸的细胞转染。

MCE HP PolyFast 转染试剂具有以下优点：

1. 适用范围广：针对常见的细胞和难转细胞、原代细胞等，均表现出卓越的转染效率；

2. 转染效率高：阳离子高分子表面引入细胞穿膜肽和内涵体逃逸促进剂，转染效果更优；

3. 细胞毒性低：能较好平衡高转染效率与细胞活力，作用温和；

4. 配方优化：优化配方后可直接加入到培养基中，血清不影响转染效率，减少去血清对细胞的损伤；

5. 操作简便：实验方案简单快速，结果稳定可靠，转染后无需去除复合物或更换新鲜培养基。

-20°C, 1 年

避免反复冻融

1) 贴壁细胞：转染前一天，将消化后的细胞按照 0.5 - 1.5 × 10⁵ 个细胞/孔铺板，使其在转染时密度为 50%。

2) 悬浮细胞：转染当天，配制转染试剂-核酸复合物之前，先进行细胞铺板，每 500 μL 生长培养基中加入 1 - 3 × 10⁵ 个细胞。

注：为提高转染效率，建议使用生长状态良好且生长处于指数期、存活率大于 90% 的细胞进行转染。

1) 取 0.5 μg 质粒加入到 1.5 mL 离心管中，加入 2 μL 转染试剂与质粒混合，室温静置孵育 3 min。

注：最佳转染条件因细胞类型和培养条件不同而有所区别，可做预实验摸索最佳转染比例。对于 24 孔板，DNA 推荐用量为 0.2 - 0.6 μg，转染试剂推荐用量为 1 - 4 μL。

2) 加入 100 μL 减血清培养基（无血清无双抗），轻柔混匀，室温静置孵育 30 min，即形成转染试剂-核酸复合物。

细胞更换新鲜的预热的完全培养基 (500 μL/孔)并将上述 100 μL 转染试剂-核酸复合物 (100 μL) 加入每孔细胞，轻柔混匀，放置于培养箱中继续培养。

注：对于悬浮细胞系在转染 5 h 后可选择加入 PMA 和/或 PHA 以提高 CMV 启动子的活性并促进基因表达。如 Jurkat 细胞添加终浓度分别为 50 ng/mL、1 μg/mL 的 PMA 和 PHA，可以提高 CMV 启动子活性和基因表达；K562 细胞只添加 PMA 即可提高 CMV 启动子活性。

转染细胞培养 24 - 48 h 后，可使用荧光检测法、Western Blot、ELISA、RT - PCR、流式细胞术、报告基因等检测转染效果，或进行后续功能实验。

1. 为了获得较高的转染效率，建议选用高纯度、无菌、无污染、无内毒素的核酸。

2. 细胞状态会极大影响转染效率，建议使用生长状态良好且生长处于指数期、存活率 > 90% 的细胞进行转染。

3. 不同细胞的转染实验对细胞密度要求不尽相同，可根据需要优化相应实验条件。同时，建议在实验过程中保证相同的接种条件以确保实验的可重复性。

4. 转染过程中，抗生素的存在可能导致转染效率降低及细胞毒性，不建议在转染培养基中添加抗生素。

5. 血清会影响转染试剂-核酸复合物的形成，建议在制备复合物过程中使用无血清培养基。

6. 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、核酸质量及浓度、转染试剂与核酸比例等，建议先做预实验摸索最佳转染条件。

7. 由于特殊培养基中的某些成分可能会抑制阳离子聚合物介导的转染，因此有必要做检测特殊培养基与本产品的相容性。

8. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。