Green Fluorescent Rapid Labeling Kit (FITC） 

绿色荧光快速标记试剂盒（FITC）

荧光标记服务指将荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，借助荧光特性对被标记对象进行定性、定位以及定量分析，具有无放射物污染、操作简便、容易观察等优点，其应用已深入到药物学、生理学、环境科学、信息科学等诸多领域，在蛋白的功能研究、药物筛选等领域也具有广泛的应用。 绿色荧光快速标记试剂盒（AF488）可对蛋白进行绿色荧光标记，最大激发/发射波长：480/525 nm，基于NHS酯反应化学，NHS酯活化的荧光染料和待标记抗体/蛋白在pH7-9溶液中与伯胺反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体/蛋白的偶联。一般一 个 IgG 分子可结合 2-8 个分子的 AF488。整体实验可在2小时内完成。

4°C 1年

3.试剂盒使用方法 3.1样本处理 准备好待标记抗体/蛋白 1）buffer pH要求：pH 6.5-8.5。 2）buffer 组分要求：理想的buffer：PBS；HEPES；钾盐；钠盐。 3）有限制的成分：Tris需要≤ 50 mM / 0.6%；BSA≤0.1%；甘油≤10%。 4）不能含有的成分：精氨酸；谷胱甘肽；DTT。 注：如果buffer不能满足要求，需要先将样品在PBS中透析，小量样品可采用微量透析杯。 5）蛋白浓度需大于1mg/mL，最佳为2mg/mL，如果浓度过低，需先用超滤管进行浓缩。 3.2 染料母液配制 用染料溶解液溶解冻干粉末，将染料溶解液加入染料中，配好以备用 1）试剂盒规格（50-200μg）：加入25ul； 2）试剂盒规格（200μg-1mg）：加入110ul。 3.3 标记 抗体（蛋白）质量：将溶解好的染料按照染料体积=1：10（例：每50ug抗体（蛋白）加入5ul染料）加入到待标记抗体/蛋白中*，混匀，放入避光袋中，于摇床上摇晃或旋转反应30min-1h。； *加入过程中可能出现少量絮状物，枪头吹打几次，摇晃混匀后絮状物会消失。 *旋转反应30min即可达到90%反应率，3h反应率＞98%，如果希望提高反应率，可增加反应时间，或4℃过夜。 3.4 纯化 3.4.1预处理纯化柱 解开封口膜，1000 g离心2min，弃掉外管液体，将纯化柱内管放入1.5ml收集管中，待用。 3.4.2 收集 离心机瞬离后，全部转移到纯化柱内管中，静置1min后1000g离心2min，收集标记产物，弃纯化柱内管。