1. Others
  2. Fluorescent Dye
  3. D-Luciferin sodium

D-Luciferin sodium  (Synonyms: D-萤光素钠盐; D-(-)-Luciferin sodium; Firefly luciferin sodium; Beetle Luciferin sodium)

目录号: HY-12591 纯度: 99.92%
COA 产品使用指南

D-Luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。化学发光技术实际上是无背景的,使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准荧光计数仪中可以可靠地测量到 0.02 pg 的荧光素酶。除了用于基因表达的外,荧光素酶还用于 ATP 的检测。MCE提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004) 、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B) 。

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D-Luciferin sodium Chemical Structure

D-Luciferin sodium Chemical Structure

CAS No. : 103404-75-7

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IF

    D-Luciferin sodium purchased from MCE. Usage Cited in: Acta Pharm Sin B. 12 March 2022.

    Tumor growth is monitored by bioluminescence imaging. Prior to imaging, D-luciferin substrate is injected intraperitoneally into the mice (150 mg/kg per mouse).

    D-Luciferin sodium purchased from MCE. Usage Cited in: New Phytol. 2022 Sep 2.  [Abstract]

    ERF16-nLUC and CaM2-cLUC vectors are cotransfected in N. benthamiana leaves. 10 min after the abaxial sides of leaves are sprayed with 1 mM Luciferin.

    D-Luciferin sodium purchased from MCE. Usage Cited in: Pharmacol Res. 2021 Mar 2;105527.  [Abstract]

    After cell inoculation for 7 days, mice are injected intraperitoneally with D-luciferin substrate at 150 mg/kg and anesthetized 10% chloral hydrate (5 mL/kg).

    D-Luciferin sodium purchased from MCE. Usage Cited in: Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 2021;12(3):839-856.

    HEK293T cells are seeded into a 6-well plate and transfected with in vitro synthesized mRNA containing the luciferase gene by Lipofectamine 2000. Luciferase substrate D-Luciferin sodium salt (1 mM) is added into the culture medium immediately after transfection. Luciferase activity is detected on the GloMax 96 Microplate Luminometer.

    D-Luciferin sodium purchased from MCE. Usage Cited in: Cell Death Dis. 2020 Sep 17;11(9):765.  [Abstract]

    At Day 10, 25, and 31, mice are anesthetized with isoflurane and then injected with 75 mg/kg D-Luciferin solution for imaging.
    • 生物活性

    • 实验参考方法

    • 纯度 & 产品资料

    • 参考文献

    生物活性

    D-luciferin is the natural substrate of the enzyme luciferase (Luc) that catalyzes the production of the typical yellowgreen light of fireflies. The 560 nm chemiluminescence from this reaction peaks within seconds, with light output that is proportional to luciferase concentration when the substrate luciferin is present in excess. The luciferase (luc) gene is a popular reporter gene for research and agent screening. Chemiluminescent techniques are virtually background-free, making the luc reporter gene ideal for detecting low-level gene expression. As little as 0.02 pg of luciferase can be reliably measured in a standard scintillation counter. In addition to its role as a reporter of gene expression, luciferase is commonly used in an extremely sensitive assay for ATP[1]. We of er the firefly luciferase (HY-P1004), luciferin free acid (HY-12591A), as well as its water-soluble sodium salts (HY-12591) and potassium salts (HY-12591B) .

    体外研究
    (In Vitro)

    1. 注意事项
    a) D-萤光素盐易溶于水性缓冲液 (pH 6.1-6.5),溶解度最高可达 100 mM。储备液可用不含 ATP 的水配制,并在 -20°C 下避光保存。游离酸必须用适当的碱中和才能溶解。在较高的 pH 值下,荧光素会在碱催化下形成脱氢荧光素,并外消旋化为 L-异构体。
    b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或 ATP 分析系统。
    c) 如果测试 ATP,请戴上手套并使用不含 ATP 的容器,以尽量减少所有可能的 ATP 污染源。仅使用无菌的无 ATP 水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。
    2. 实验方案
    本方案仅提供一个指导,应根据您的具体需要进行修改。
    以下方案是钾和钾的示例钠盐制备。它适用于大多数细胞类型和体内动物使用。
    2.1 体外生物发光图像分析的示例方案
    a) 在无菌水中制备 100 mM (100-200X) 荧光素原液。拌匀。立即使用,或一次性分装,-20°C保存,避免冻融循环,避免光照。
    b) 制备0.5-1 mM D-Luciferin工作液于pre-加热的组织培养基。
    c) 从培养的细胞中吸出培养基。
    d) 向细胞中加入荧光素工作溶液,并在成像前将细胞在 37°C 下孵育 5-10 分钟。
    2.2 体内生物发光图像分析的示例方案
    a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL 荧光素原液,不含 Mg2+ 和 Ca2+。混合均匀。
    b) 过滤器通过 0.2 μM 过滤器对溶液进行除菌。立即使用,或一次性分装,并储存在 -20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。
    c) 成像前 10-15 分钟腹膜内 (ip) 注射荧光素在动物体重的 150 mg/kg (或 10 μL/g 荧光素原液) 下。
    注意:应对每个动物模型进行荧光素动力学研究以确定峰值信号时间。
    2.3 荧光素报告基因检测的示例方案
    a) 在无菌水中制备 100 mM 荧光素原液。立即使用,或一次性分装,-20°C 保存,避免冻融循环,避免暴露在光线下。
    b) 制备 1 mM 的 D-Luciferin 工作溶液和 3 mM ATP,1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 在 25 mM Tricine 缓冲液 pH 7.8 中。
    c) 将 5-10 μL 细胞裂解物移至微孔板中。使用裂解试剂或不含裂解物的缓冲液作为空白。
    d) 根据制造商的说明用荧光素工作溶液灌注发光计。
    e) 立即注入 200 μL 荧光素工作溶液,积分时间为 10 s.

    MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

    体内研究
    (In Vivo)

    使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因和 D-荧光素作为底物的生物发光成像 (BLI) 是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图,以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外,D-荧光素注射后固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号被确定为峰值信号的替代信号。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化,以表示 D-荧光素注射后的时间变化模式[3]
    注入 10 μL每克体重的 D-萤光素 (腹膜内或静脉内) 储备液:标准 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常约 200 μL。
    解冻 D-萤光素 (钾盐或钠盐) 室温并溶解在 dPBS (不含钙或镁) 中,最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 的无菌 H2O 润湿0.22 μM 过滤器并丢弃水。通过准备好的 0.22 μM 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行消毒。

    MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

    分子量

    302.30

    Formula

    C11H7N2NaO3S2

    CAS 号
    性状

    固体

    颜色

    Light yellow to gray

    中文名称

    D-萤光素钠盐

    运输条件

    Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

    储存方式

    4°C, sealed storage, away from moisture and light

    *In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

    溶解性数据
    In Vitro: 

    H2O 中的溶解度 : 250 mg/mL (826.99 mM; 超声助溶 (<60°C))

    DMSO 中的溶解度 : 100 mg/mL (330.80 mM; 超声助溶; 吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响,请使用新开封的 DMSO)

    配制储备液
    浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
    1 mM 3.3080 mL 16.5399 mL 33.0797 mL
    5 mM 0.6616 mL 3.3080 mL 6.6159 mL
    查看完整储备液配制表

    * 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效
    储备液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C储存时,请在6个月内使用,-20°C储存时,请在1个月内使用。

    * 备注:如您选择水作为储备液,请稀释至工作液后,再用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌后使用。

    • 摩尔计算器

    • 稀释计算器

    Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)

    质量
    =
    浓度
    ×
    体积
    ×
    分子量 *

    Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)

    This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2

    浓度 (start)

    C1

    ×
    体积 (start)

    V1

    =
    浓度 (final)

    C2

    ×
    体积 (final)

    V2

    In Vivo:

    请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。

    以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂:
    ——为保证实验结果的可靠性,澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用
    以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶

    • 方案 一

      请依序添加每种溶剂: 10% DMSO    40% PEG300    5% Tween-80    45% Saline

      Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.27 mM); 澄清溶液

      此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液。

      1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;再向上述体系中加入 50 μL Tween-80,混合均匀;然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL

      生理盐水的配制:将 0.9 g 氯化钠,溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL,可以得到澄清透明的生理盐水溶液。
    • 方案 二

      请依序添加每种溶剂: 10% DMSO    90% (20% SBE-β-CD in Saline)

      Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.27 mM); 澄清溶液

      此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液。

      1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中,混合均匀。

      20% SBE-β-CD in Saline 的配制(4°C,储存一周):2 g SBE-β-CD(磺丁基醚 β-环糊精)粉末定容于 10 mL 的生理盐水中,完全溶解至澄清透明。

    以下溶解方案,请直接配置工作液。建议现用现配,在短期内尽快用完。 以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比; 如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶。

    • 方案 一

      请依序添加每种溶剂: PBS

      Solubility: 100 mg/mL (330.80 mM); 澄清溶液; 超声助溶

    动物溶解方案计算器
    请输入动物实验的基本信息:

    给药剂量

    mg/kg

    动物的平均体重

    g

    每只动物的给药体积

    μL

    动物数量

    由于实验过程有损耗,建议您多配一只动物的量
    计算结果
    工作液所需浓度 : mg/mL
    该产品水溶性佳,请具体参考实测 水 / PBS / Saline 中的溶解度数据。
    您所需的储备液浓度超过该产品的实测溶解度,如有需要,请与 MCE 中国技术支持联系。
    纯度 & 产品资料

    纯度: 99.92%

    染色示例
    参考文献
    Animal Administration
    [3]

    Mice[3]
    In vivo BLI is performed using a cooled charge-coupled device camera system (IVIS Imaging System 100) 3, 5, 7, 10, 12, 14, 19, 21, 24, and 28 days after the inoculation of HCT116-Luc cells. Mice are injected with 75 mg/kg D-luciferin in 100 μL of phosphate-buffered saline subcutaneously near the scapula and were placed in the light-tight chamber of the imaging system. Beginning 5 min after injection, dorsal luminescent images with an exposure time of 1 s are acquired sequentially at a rate of one image per min until 20 min after D-luciferin injection. Data acquisition is continued until 40 min postinjection on days 3 or 5 and until 25 min on day 7, because of the prolonged time course of light emission. Binning is 4 and the field of view is 15 cm.

    MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

    参考文献

    D-Luciferin sodium 相关分类

    完整储备液配制表

    * 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效
    储备液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C储存时,请在6个月内使用,-20°C储存时,请在1个月内使用。

    可选溶剂 浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg 25 mg
    DMSO / H2O 1 mM 3.3080 mL 16.5399 mL 33.0797 mL 82.6993 mL
    5 mM 0.6616 mL 3.3080 mL 6.6159 mL 16.5399 mL
    10 mM 0.3308 mL 1.6540 mL 3.3080 mL 8.2699 mL
    15 mM 0.2205 mL 1.1027 mL 2.2053 mL 5.5133 mL
    20 mM 0.1654 mL 0.8270 mL 1.6540 mL 4.1350 mL
    25 mM 0.1323 mL 0.6616 mL 1.3232 mL 3.3080 mL
    30 mM 0.1103 mL 0.5513 mL 1.1027 mL 2.7566 mL
    40 mM 0.0827 mL 0.4135 mL 0.8270 mL 2.0675 mL
    50 mM 0.0662 mL 0.3308 mL 0.6616 mL 1.6540 mL
    60 mM 0.0551 mL 0.2757 mL 0.5513 mL 1.3783 mL
    80 mM 0.0413 mL 0.2067 mL 0.4135 mL 1.0337 mL
    100 mM 0.0331 mL 0.1654 mL 0.3308 mL 0.8270 mL

    * 备注:如您选择水作为储备液,请稀释至工作液后,再用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌后使用。

    Help & FAQs
    • Do most proteins show cross-species activity?

      Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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    D-Luciferin sodium
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