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Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 

双荧光素酶试剂盒

Cat. No.: HY-K1013
Manual SDS

MCE 双荧光素酶试剂盒含有高纯度的 D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液，实现哺乳动物细胞双萤光素酶报告基因检测。

Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

1.  客户无需承担相应的运输费用。

2.  同一机构（单位）同一产品试用装仅限申领一次，同一机构（单位）一年内

     可免费申领三个不同产品的试用装。

3.  试用装只面向终端客户。

规格 价格 是否有货 数量
100 T ￥2200 In-stock

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  • 描述及优势

  • 储存条件 & 期限

  • 操作流程

  • 包装

  • 文件资料

描述及优势

MCE 双荧光素酶试剂盒中含有高纯度的D-荧光素、腔肠素以及比例优化的反应缓冲液。在双荧光素酶反应中，首先用 Firefly Luciferase Working Solution (含D-荧光素)检测萤火虫荧光素酶信号；随后，直接加入 Renilla Luciferase Working Solution (含腔肠素)，将萤火虫荧光素酶的信号猝灭，同时产生海肾荧光素酶信号。本试剂盒具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点。
储存条件 & 期限

-20℃, 1 年

避光保存
操作流程

1. 配制试剂

1.1 Lysis Buffer (1×) 的配制

将 Lysis Buffer (5×) 用超纯水稀释 5 倍，配制成 1× 工作液。

1.2 萤火虫荧光素酶工作液 (Firefly Luciferase Working Solution) 的配制

将 Firefly Luciferase Substrate 干粉管短暂离心后开盖，加入 1 mL Firefly Luciferase Buffer 将其全部溶解并混合均匀，然后将全部溶液移入剩余的 9 mL Firefly Luciferase Buffer 中，混匀。

1.3 海肾荧光素酶工作液 (Renilla Luciferase Working Solution) 的配制

将 Renilla Luciferase Substrate 短暂离心后开盖，加入 1 mL Renilla Luciferase Buffer 混合均匀，然后将全部溶液移入剩余的 9 mL Renilla Luciferase Buffer 中，混匀。

Note: 所有试剂使用前需平衡至室温。萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶工作液配制完成后，分装、避光保存，避免反复冻融，-80℃可保存一年，-20℃可保存一个月。

2. 裂解细胞

2.1 细胞裂解时密度应小于 95%，细胞生长过密，易导致裂解不充分。质粒瞬转、病毒感染细胞后，需培养一段时间 (一般 48 小时)使荧光素酶充分表达。

2.2 去除培养基，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 1 遍，注意不要将细胞吹起。

2.3 加入适量的 1× Lysis Buffer，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。推荐用量见下表

孔板类型 Lysis Buffer/孔
6-孔板 500 μL
12-孔板 200 μL
24-孔板 100 μL
48-孔板 50 μL
96-孔板 30 μL

2.4 将细胞培养板置于摇床上，室温、轻晃孵育 15 分钟。

注：细胞数量较高时，可适当加大裂解液用量、延长裂解时间。

2.5 将裂解物转移到新的离心管中，4℃、12,000 rpm 离心 10 分钟，取上清备用。

3. 荧光检测

3.1 取 20 μL 细胞裂解物，加至 96 孔黑色不透底酶标板中。

3.2 取 100 μL 平衡至室温的萤火虫荧光素酶工作液加至上述反应板中，混匀后，用酶标仪测定萤火虫荧光素酶信号。

3.3 取 100 μL 平衡至室温的海肾荧光素酶工作液加至上述反应板中，混匀后，用酶标仪测定海肾荧光素酶信号。

3.4 结果分析：在以海肾萤光素酶为内参的情况下，用萤火虫萤光素酶所得发光值除以海肾萤光素酶所得发光值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。

注：为了确保实验结果准确性，萤火虫荧光素酶 (fLuc) 和海肾荧光素酶 (rLuc) 的发光值均应为相对发光值 (RLU, relative light unit)。

包装
Contents HY-K1013-100T
Firefly Luciferase Buffer 10 mL
Firefly Luciferase Substrate (Lyophilized) 1 vial
Renilla Luciferase Buffer 10 mL
Renilla Luciferase Substrate (125×) 80 μL
Lysis Buffer (5×) 10 mL
文件资料
Help & FAQs
  • Do most proteins show cross-species activity?

    Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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双荧光素酶试剂盒
目录号：
HY-K1013
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