Cyanine5 DBCO  (Synonyms: DBCO-Cy5; Cyanine5 dibenzocyclooctyne)

Cyanine5 DBCO (DBCO-Cy5) is a low-toxicity azide reactive probe (NIR fluorescent dye), for imaging azide-labeled biomolecules via a copper-free "click-through" reaction. Cyanine5 DBCO has no apparent cytotoxicity or animal toxicity and shows no damage to the physiological functions of cells other than the target cells (azide-labeled cells). Cyanine5 DBCO can be used to label and track cells in vitro and in vivo (Ex=635 nm, Em=650-700 nm)^[1][2].

指南 (以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指南，应根据您的具体需要进行修改)。
细胞标记 (例如A549细胞)^[5][2]：
1. 将 2 mL 生长的种子细胞以 3×10⁴ (因细胞而异) 的密度接种到 35 毫米玻璃底培养皿中
2. 加入Ac4ManNAz (50 μM，终浓度)，孵育3天 (在细胞表面产生叠氮基团)。
3. 用 DPBS (pH 7.4) 洗涤细胞两次。
4. 用 Cyanine5 DBCO (20 μM，终浓度) 在 37℃孵育细胞 1 h℃。
5. DPBS (pH 7.4) 冲洗细胞，甲醛-戊二醛联合固定液25℃固定15 min。
6. DPBS 洗涤细胞两次 (pH 7.4) 并用 DAPI 染色细胞以标记细胞核。
7. 使用共聚焦激光扫描显微镜测量 Cyanine5 DBCO 荧光 (Ex=635 nm，Em=650-700 nm)。
注意:
1) 在用 Ac4ManNAz 处理后，Cyanine5 DBCO 可以靶向细胞表面人工引入的叠氮基团超过 3 天。
2) 程度Cyanine5 DBCO 标记具有剂量依赖性。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

指南 (以下是我们推荐的方案。此方案仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改)。
体内细胞追踪^[1][2]：
1. 将含有 2 mL 生长培养基的种子细胞以 3×10⁴ (因细胞而异) 的密度接种到 35 毫米玻璃底培养皿上。
2. 加入Ac4ManNAz (50 μM，终浓度)，孵育3天 (在细胞表面产生叠氮基团)。
3. 洗涤用 DPBS (pH 7.4) 对细胞进行两次处理。
4. 对小鼠进行麻醉，然后将细胞 (经过 Ac4ManNAz 处理后) 注入肝左叶。
5. 注入 Cyanine5 DBCO (25 μM，200 μL) 到尾静脉 (3 天 将细胞注射到肝脏后)。
6. 测量 Cyanine5 DBCO 荧光 (Ex=635 nm，Em=650-700 nm)。体内近红外荧光 (NIRF) 图像是通过体内成像系统获得的。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

929.03

C₅₃H₅₉F₆N₄O₂P

2360411-64-7

固体

Dark purple to black

668

647

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, protect from light, stored under nitrogen

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)

* 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。

• [1]. Kang SW, et al. Cell labeling and tracking method without distorted signals by phagocytosis of macrophages. Theranostics. 2014 Feb 12;4(4):420-31.  [Content Brief]

  [2]. Zhu L, et al. Coupling Aptamer-based Protein Tagging with Metabolic Glycan Labeling for In Situ Visualization and Biological Function Study of Exosomal Protein-Specific Glycosylation. Angew Chem Int Ed Engl. 2021 Aug 9;60(33):18111-18115.  [Content Brief]

  [3]. Song S, et al. In Situ One-Step Fluorescence Labeling Strategy of Exosomes via Bioorthogonal Click Chemistry for Real-Time Exosome Tracking In Vitro and In Vivo. Bioconjug Chem. 2020 May 20;31(5):1562-1574.  [Content Brief]