Sulfo-NHS-LC-Biotin 

Sulfo-NHS-LC-Biotin is an amine-reactive ester derivative of biotin and cannot pass the intact blood-retinal barrier. It can be used to assess vascular permeability of the brain and retinal vasculature.

指南 (以下是我们推荐的协议。该协议仅提供指南，应根据您的具体需求进行修改)。
计算：
为获得最佳结果，对 10 mg/mL 蛋白质溶液使用 ≥ 12 倍摩尔过量的生物素，或对 2 mg/mL 蛋白质溶液使用 ≥ 20 倍摩尔过量的生物素。
1. 计算要添加到反应中以获得 20 倍摩尔过量的生物素试剂毫摩尔数：
mL 蛋白质 × (mg 蛋白质/mL 蛋白质) × (mmoL 蛋白质/mg 蛋白质)× (20 mmoL 蛋白质/mmoL 蛋白质)= mmoL 生物素。
* 20 = 对于 2 mg/mL 蛋白质样品，建议的生物素摩尔过量倍数
2.计算要加入到反应中的 10 mM 生物素试剂溶液（步骤 B.3 中制备）的微升数：
mmoL 生物素 × (1000000 μL/L)× (L/ 10 mmoL)=μL 生物素
生物素标记反应：
1. 根据计算中的计算，将 1-10 mg 蛋白质溶解于 0.5-2.0 mL PBS 中。
2. 使用前，在有机溶剂 (如 DMSO) 中制备 10 mM 生物素试剂溶液。
3. 将适当体积 (μL) 的 10 mM 生物素试剂溶液加入蛋白质溶液中。
4. PBS 或其他 pH 7-8 的无胺缓冲液用作反应缓冲液。
5.将反应物在冰上孵育两小时或在室温下孵育 30 分钟。
6.通过 ELISA 或 Western blot 检测标记蛋白。

1. 用冰冷的 PBS (pH 8.0) 清洗细胞三次，以去除细胞中的含胺培养基和蛋白质。
2. 将细胞悬浮于 PBS (pH 8.0) 中，浓度约为 25 × 10⁶ 个细胞/毫升。
3. 每毫升细胞悬液加入1.0 mg Sulfo-NHS-LC-Biotin 试剂 (最终生物素试剂浓度约为 2 mM)。
4. 将反应混合物在室温下孵育 30 分钟。
注意：在 4°C 下进行此孵育可能会降低生物素试剂的活性内化。
5. 用 PBS + 100 mM 甘氨酸清洗细胞三次，以淬灭并去除多余的生物素试剂和副产物。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

534.60

C₂₀H₃₀N₄O₉S₂

190598-57-3

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Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.

• [1]. Wan E, Ogawa M, Okajima T. A Blood-retina Barrier Permeability Assay in Young Mice Using Sulfo-NHS-LC-biotin Perfusion[J]. Bio-protocol, 2018: e3064-e3064.