BCECF-Acetoxyemnethy ester 

BCECF-Acetoxyemnethy ester is a cell membrane permeable compound widely-used as a fluorescent indicator for intracellular pH. BCECF-Acetoxyemnethy ester could diffuse through the cell membrane and intracellular esterase cleave the ester bond releasing BCECF (HY-101882). BCECF allows measurements in the physiological pH range 6.0-8.0. Excitation ratio: 490/440 nm; Emission intensity: 535 nm^[1].

用于测量细胞溶质的 pH 敏感荧光染料pH^[2][3]。
1. 在 DMSO 中制备 5 mM BCECF-Acetoxyemnethy ester 原液。
2. 在 NMG 缓冲液 (10 mM HEPES、60 mM KCl、3 mM MgCl2，pH 6.8) 或 PBS 中制备 3-5 μM BCECF-Acetoxyemnethy ester 染料工作溶液。​​
3. 将 BCECF-Acetoxyemnethy ester 染料工作溶液 (3-5 µM) 加入细胞板中，37°C 避光孵育 30-60 分钟。
4. 用 PBS 洗涤细胞三次。
5. 通过监测 Ex/Em = 490/535 nm 或 440/535 nm 处的荧光来进行 pH 测定。

标准曲线测定：
1. pH 校准缓冲液：130 mM KCl, 1 mM MgCl2, 15 mM HEPES, 15 mM MES (HY-D0858), 10 μM Nigericin sodium salt (HY-100381) 和 10 μM Valinomycin (HY-N6693) (使细胞内外 pH 达到平衡)。可用 NaOH 或者 HCl 调至 pH 为 6.5, 7.0, 7.5, 8.0 和 8.5。
2. 将染色后的细胞分别在 pH 6.5, 7.0, 7.5, 8.0 和 8.5 的校准缓冲液中孵育 10 分钟。
3. 检测各 pH 对应的 F490/F440 比值，以 pH 为横坐标，荧光比值为纵坐标，绘制标准曲线 (符合 S 形曲线，可通过 Henderson-Hasselbalch 方程拟合)。
4. 实验中测得的未知样品荧光比值 (R) 代入标准曲线，即可求出对应的 pH。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

880.76

C₄₂H₄₀O₂₁

油状物

Brown to reddish brown

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, protect from light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light)

• [1]. Ozkan P, et al. A rapid method for measuring intracellular pH using BCECF-AM. Biochim Biophys Acta. 2002 Aug 15;1572(1):143-8.  [Content Brief]

  [2]. Chen F, et al. CYP51A1 drives resistance to pH-dependent cell death in pancreatic cancer. Nat Commun. 2025 Mar 7;16(1):2278.  [Content Brief]

  [3]. Pang X, et al. Weak acids produced during anaerobic respiration suppress both photosynthesis and aerobic respiration. Nat Commun. 2023 Jul 14;14(1):4207.  [Content Brief]