L-012 

L-012 is a luminal-based chemiluminescent probe. L-012 sodium salt can detect NADPH oxidase (Nox)-derived superoxide and nitrogen species (reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS))^[1][2].

1. 溶液配置
^[1] 1.1 制备储存液
溶剂：DMSO 或者超纯水
浓度：建议 10 mM。
保存：分装后 -20°C 或 -80°C 避光保存，避免反复冻融。
1.2 工作液的配制
用 PBS 或无血清细胞培养基稀释至 1-10 μM (根据实验优化)。
注意：工作液现配现用，避光。

2 无细胞体系产生的活性氧 (ROS) 测定。
2.1 在 KRP (Krebs-Ringer 磷酸盐缓冲液) 中存在 1 mM 次黄嘌呤时，黄嘌呤氧化酶 (6.4 mU/ml) 在 37°C 下生成超氧化物。
2.2 用于测定的 L-012、鲁米诺和 MCLA 的浓度分别为 4 μM、100 μM 和 4 μM。
2.3 在 KRP 中，将 100 μM DTPA、1 mM H2O2 和 50 μM FeSO4 在 37°C 下孵育，可生成羟基自由基。
2.4 使用发光读数仪检测。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

NF-κB-荧光素酶报告小鼠^[2].
通过注射底物荧光素在体内监测荧光素酶活性。
L-012（25 mg/kg，100 μL）通过静脉注射 (iv)、腹膜内注射 (ip) 或皮下注射 (sc) 给药。
使用活体成像进行检测。
图像曝光时间在 5 秒至 2 分钟之间，具体取决于信号强度。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

288.69

C₁₃H₉ClN₄O₂

143323-55-1

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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• [1]. Imada I, et al. Analysis of reactive oxygen species generated by neutrophils using a chemiluminescence probe L-012[J]. Analytical biochemistry, 1999, 271(1): 53-58.  [Content Brief]

  [2]. Kielland A, et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012. Free Radic Biol Med. 2009;47(6):760-766.  [Content Brief]