Resorufin benzyl ether  (Synonyms: BzRes; 7-Benzyloxyresorufin; 7-Benzyloxyphenoxazone)

Resorufin benzyl ether (BzRes), a fluorogenic enzyme substrate, can be used to detect CYP3A4 enzyme activity. Resorufin benzyl ether modified with a recognizing moiety boronate, can be used for ONOO^- detection via a self-immolation mechanism. Ex/Em=530-570 nm/590 nm^[1][2][3].

CYP3A4 活性测定^[2]:
1. 准备反应溶液。
a. 标准原液含有 1 mM Resorufin benzyl ether，以其为荧光底物。将 5mg Resorufin benzyl ether 溶解在 1mL 2% w/v 的 Poloxamer 188 (HY-D1005A)、500 mL Dimethyl sulfoxide (HY-Y0320) 和 3.5 mL 乙腈的混合物中。 b. 新鲜配制 CYP3A4 酶液。将 5mL 1mM 酶原液与 995 mL 缓冲液稀释，得到 5 nM 酶溶液。 2. 测定 CYP3A4 活性
a. 在 96 孔板中反应。在每个孔中加入 99 mL 缓冲混合液，1 mL 1 mM Resorufin benzyl ether。调整至最终浓度 5 mM。
b. 在 37℃ 孵育 30 分钟之前，转移 100 mL 5 nM 酶液。
c. 在激发波长 (lex=570 nm) 和发射波长 (lem=590 nm) 荧光检测下进行酶活性测定。
d. 影响 CYP3A4 活性测定的因素。如缓冲液 (磷酸盐、Tris-HCl 缓冲液)、缓冲液浓度 (50-200 mM)、培养时间 (0-50 min)。

CYP3A4 代谢活性测定^[3]：
1. 加入 CYP3A4 酶至最终浓度为 5 pmol/孔。
2. 每次反应使用 50 pM 底物和 200 mM 磷酸钾缓冲液。< br / > 3. 在测量代谢物荧光之前，用 BzRes 孵育 45 分钟。激发波长 (Ex) 为 530 nm，发射波长 (Em) 为590 nm。
4. 将全强度提取物的浓度指定为 100% (在最终测定量中稀释为 1:4)。
5. 以 1:3 重复稀释两次 100% 提取物。计算荧光值的均值和标准差。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

303.31

C₁₉H₁₃NO₃

87687-02-3

7-苄氧基-3H-吩恶嗪-3-酮

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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• [1]. Ji X, et al. Regulating the activity of boronate moiety to construct fluorescent probes for the detection of ONOO-in vitro and in vivo. Anal Methods. 2022 Dec 15;14(48):5027-5033.  [Content Brief]

  [2]. Nuchtavorn N, et al. Paper-based sol-gel thin films immobilized cytochrome P450 for enzyme activity measurement. Anal Chim Acta. 2020 Feb 15;1098:86-93.  [Content Brief]

  [3]. Yale SH, et al. Analysis of the inhibitory potential of Ginkgo biloba, Echinacea purpurea, and Serenoa repens on the metabolic activity of cytochrome P450 3A4, 2D6, and 2C9. J Altern Complement Med. 2005 Jun;11(3):433-9.  [Content Brief]