DOTA Rapid Labeling Kit  

DOTA快速标记试剂盒

DOTA是一种能与重金属离子发生螯合作用的有机分子,可以与放射性同位素如52Mn, 55Co, 64Cu, 66Ga, 86Y, 89Zr, 152Tb等结合，形成稳定的螯合物。这些螯合物可以用于制备放射性示踪剂，用于PET扫描、SPECT扫描、放射性治疗和其他核医学应用。 DOTA快速标记试剂盒可对蛋白进行DOTA标记，基于NHS酯反应化学，NHS酯活化的荧光染料和待标记抗体/蛋白在pH7-9溶液中与伯胺反应，形成稳定的酰胺键，从而实现与抗体/蛋白的偶联。一般一个 IgG 分子可结合 2-8 个分子的 DOTA。整体实验可在2小时内完成。

4°C 1年

3.试剂盒使用方法 3.1样本处理 准备好待标记抗体/蛋白 1）buffer pH要求：pH 6.5-8.5。 2）buffer 组分要求：理想的buffer：PBS；HEPES；钾盐；钠盐。 3）有限制的成分：Tris需要≤ 50 mM / 0.6%；BSA≤0.1%；甘油≤10%。 4）不能含有的成分：精氨酸；谷胱甘肽；DTT。 注：如果buffer不能满足要求，需要先将样品在PBS中透析，小量样品可采用微量透析杯。 5）蛋白浓度需大于1mg/mL，最佳为2mg/mL，如果浓度过低，需先用超滤管进行浓缩。 3.2 染料母液配制 用染料溶解液溶解冻干粉末，将染料溶解液加入染料中，配好以备用 1）试剂盒规格（50-200μg）：加入25ul； 2）试剂盒规格（200μg-1mg）：加入110ul。 3.3 标记 抗体（蛋白）质量：将溶解好的染料按照染料体积=1：10（例：每50ug抗体（蛋白）加入5ul染料）加入到待标记抗体/蛋白中*，混匀，放入避光袋中，于摇床上摇晃或旋转反应30min-1h。； *加入过程中可能出现少量絮状物，枪头吹打几次，摇晃混匀后絮状物会消失。 *旋转反应30min即可达到90%反应率，3h反应率＞98%，如果希望提高反应率，可增加反应时间，或4℃过夜。 3.4 纯化 3.4.1预处理纯化柱 解开封口膜，1000 g离心2min，弃掉外管液体，将纯化柱内管放入1.5ml收集管中，待用。 3.4.2 收集 离心机瞬离后，全部转移到纯化柱内管中，静置1min后1000g离心2min，收集标记产物，弃纯化柱内管。