IRDye 700DX  (Synonyms: IRDye 700DX NHS ester)

IRDye 700DX (IRDye 700DX NHS ester) is a near-infrared (NIR) phthalocyanine dye with extremely high photostability and fluorescence intensity. IRDye 700DX binds to biomolecules. IRDye 700DX has excellent water solubility, large extinction coefficient, high fluorescence quantum yield, and does not aggregate in high ionic strength buffers. IRDye 700DX can be used as a highly flexible photosensitizer^[1][2][3].

细胞单分子成像^[3]
1. 近红外染料和染料-蛋白质结合物
1) 使用 NHS-酯染料衍生物将 IRDye 700DX 与生物素-转铁蛋白结合。
2) 使用 PD-10 脱盐柱将游离染料与结合物分离。
2. 染料固定
1) 用 Piranha 溶液清洗 35 mm 玻璃底培养皿，然后在室温下用 1 mg/ml BSA-生物素 (溶于 Tris-EDTA (TE) 缓冲液) 覆盖 10 min。
2) 用 TE 缓冲液清洗后，用 0.2 mg/ml 链霉亲和素 (溶于 TE 缓冲液) 覆盖培养皿 10 min。
3) 再次用 TE 缓冲液清洗培养皿，然后在室温下用 0.05 nM 单一生物素-转铁蛋白-NIR 染料结合物溶液孵育 10 min。
4) 用 TE 缓冲液洗掉多余的染料结合物，并将固定染料样品在 4°C 下储存，然后进行成像。
3. 细胞样品制备
1) MCF-7 细胞在 35 mm 玻璃底培养皿中培养，培养皿中的 RPMI 1640 培养基中补充了谷氨酰胺和胎牛血清，培养温度为 37°C，CO₂ 为 5%。
2) 将细胞在不含血清的培养基中孵育 18 h，然后在 4°C 下用 0.05 nM 生物素-转铁蛋白-IRDye 700DX (总生物素-转铁蛋白浓度为 0.1 nM) 标记 1 h。
3) 用冷 PBS 洗掉多余的生物素-转铁蛋白，并用 4% 多聚甲醛固定细胞。将样品在 4°C 下储存，直到准备进行成像。
单分子荧光成像
1) 使用 epi 或 TIRF 照明以 10 Hz 采集未标记或用转铁蛋白-IRDye 700DX 标记的 MCF-7 细胞图像。
2) 标记细胞的图像在同时用 695 nm 和 780 nm 光照射时获取。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

1954.22

C₇₄H₉₆N₁₂Na₄O₂₇S₆Si₃

916821-46-0

固体

Blue to blue-green

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

-20°C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

• [1]. Mitsunaga M, et al. Cancer cell-selective in vivo near infrared photoimmunotherapy targeting specific membrane molecules. Nat Med. 2011 Nov 6;17(12):1685-91.  [Content Brief]

  [2]. Peng X, et al. Phthalocyanine dye as an extremely photostable and highly fluorescent near-infrared labeling reagent[C]//Optical Molecular Probes for Biomedical Applications. SPIE, 2006, 6097: 113-124.

  [3]. Tynan CJ, et al. Multicolour single molecule imaging in cells with near infra-red dyes. PLoS One. 2012;7(4):e36265.  [Content Brief]