CY5-SE (solution) 

Cy5-SE (Cy5 NHS Ester) (solution) is a reactive dye for the labeling of amino-groups in peptides, proteins, and oligonucleotides. This dye requires small amount of organic co-solvent (such as DMF or DMSO) to be used in labeling reaction. This reagent is ideal for very cost-efficient labeling of soluble proteins, as well as all kinds of peptides and oligonucleotides. This reagent also works well in organic solvents for small molecule labeling. Excitation (nm) :649, Emission (nm) : 670.
Solvent and concentration: DMSO: 10 mM

Protocol
一、蛋白制备
1) 为获得最佳标记效果，请制备蛋白 (抗体) 浓度为 2 mg/mL。
2) 蛋白溶液的 PH 值为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0，应使用 1 M 碳酸氢钠进行调节。
3) 如果蛋白浓度低于 2 mg/mL，标记效率会大大降低。为获得最佳标记效率，建议终蛋白浓度范围为 2-10 mg/mL。
4) 蛋白必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 的缓冲液中，并且铵离子，否则会影响标记效率。
2.染料用量的计算
反应所需的 CY5-SE 的量取决于待标记蛋白的量，CY5-SE 与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。
Example：假设所需的 marker protein 为 500 μL 2 mg/mL IgG (MW=150,000) ，用 100 μL DMSO 溶解 1 mg CY5-SE，得到所需的 CY5-SE 体积为 5.05 μL，详细计算过程如下：
1) mmol (IgG) =mg/mL (IgG) ×mL (IgG) /MW (IgG) =2 mg/mL × 0.5 mL/150,000 mg/mmol= 6.7×10^-6 mmol
2) mmol (CY5-SE) =mmol (IgG) × 10=6.7×10^-6 mmol×10=6.7 × 10^-5 mmol
3) μL (CY5-SE) = mmol (CY5-SE) ×MW (CY5-SE) /mg/μL (CY5-SE) =6.7 ×10^-5 mmol ×753.88 mg/mmol/0.01 mg/μL=5.05 μL (CY5-SE)
3.运行偶联反应
1) 将适量新鲜制备的 10 mg/mL CY5-SE 缓慢加入到 0.5 mL 蛋白质样品中
在溶液中，轻轻摇动混匀，然后短暂离心，将样品收集在反应管底部。请勿混匀，以免蛋白样品变性失活。
2) 将反应管置于避光处，在室温下间隔轻轻孵育 60 分钟。10-15 分钟，轻轻逆转反应
4.纯化偶联物
以下方案是使用 SepHadex G-25 柱纯化染料-蛋白偶联物的示例。
1) 根据制造说明准备 SepHadex G-25 柱。
2) 将反应混合物加载到 SepHadex G-25 柱的顶部。
3) 一旦样品在顶部树脂表面下方运行，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需样品添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

753.88

C₃₇H₄₃N₃O₁₀S₂

146368-14-1

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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• [1]. Jeon HY, et al. Array-Based High-Throughput Analysis of Silk-Elastinlike Protein Polymer Degradation and C-Peptide Release by Proteases. Anal Chem. 2016;88(10):5398-5405.  [Content Brief]