Dihydrorhodamine 123 (solution) 

Dihydrorhodamine 123 (DHR 123) (solution) is a non-fluorescent reactive oxygen species (ROS) indicator. Dihydrorhodamine 123 is oxidized to fluorescent Rhodamine 123 (HY-D0816) within cells in the presence of reactive oxygen species and it localizes in mitochondria (Ex/Em = 515/536 nm).
Solvent and concentration: DMSO: 10 mM

1. 溶液配制
1.1 原液储存
分装后，避光保存于 -20°C 或 -80°C。避免反复冻融。
1.2 工作液配制
用细胞培养基稀释储备液。可根据实际情况稀释相应的储备液。注意，如果溶剂为 DMSO，则必须考虑 DMSO 的细胞毒性，并应制备溶剂对照；如果溶剂为纯水，则工作液在加入细胞前需要过滤并除菌。
注意：工作液应立即配制并使用，并避光保存。

2. 细胞染色
2.1 用活性氧诱导剂或抑制剂处理细胞。 注意：如果用氧化剂处理细胞，染色前用缓冲液或培养基冲洗细胞三次以去除化合物，避免染料被化合物直接氧化。
2.2 将 Dihydrorhodamine 123 染料原液稀释于无血清培养基中，终浓度为 5 μM。
2.3 去除细胞培养基，换成含有染料的培养基。
2.4 37°C 孵育 30 分钟。
2.5 通过荧光显微镜或流式细胞术检测。无需清洗，但可以进行清洗以减少显微镜检查的背景。

在存在 10 μM Dihydrorhodamine 123 的情况下，通过添加 50 nM phorbol 12-myristate 13-acetat (PMA) 刺激中性粒细胞 NADPH 氧化酶，可增加罗丹明生成速率。在存在 10 μM Dihydrorhodamine 123 的情况下，添加 50 nM PMA 后，细胞的荧光强度会随时间增加。在存在 10 μM Dihydrorhodamine 123 的情况下，添加 50 nM PMA 后，诱导 HL60 细胞的荧光会持续增加^[1]。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

346.39

C₂₁H₁₈N₂O₃

109244-58-8

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• [1]. Lydia M. Henderson et al. Dihydrorhodamine 123: a fluorescent probe for superoxide generation? Eur.J.Biochem. 217, 973-980.  [Content Brief]