DMG-PEG 2000 (GMP Like) 

DMG-PEG 2000 (GMP Like) is DMG-PEG 2000 (HY-112764) produced by using GMP like guidelines. GMP Like small molecules works appropriately as an auxiliary reagent for cell therapy manufacture. DMG-PEG 2000 is used for the preparation of liposome for siRNA delivery with improved transfection efficiency in vitro. DMG-PEG 2000 is also used for the lipid nanoparticle for an oral plasmid DNA delivery approach in vivo through a facile surface modification to improve the mucus permeability and delivery efficiency of the nanoparticles^[1].

脂质纳米粒子的制备

我们在此提供 FDA 批准的 mRNA-1273（一种 COVID-19 mRNA 疫苗）中 LNP 的脂质摩尔比。此配方中的脂质摩尔比为 SM-102：DSPC：胆固醇：DMG-PEG 2000 =50 : 10 : 38.5 : 1.5^[1]，RNA 与脂质的重量比为 0.05 (wt/wt)。

A. 脂质混合物的制备

1. 将脂质溶解于乙醇中，配制成10 mg/mL 的储备溶液。脂质储备溶液可储存于 -20°C 以备后用。

注意事项 1： 可电离脂质通常是液体。由于其粘性，应始终称重，而不是依赖自动移液器的体积。

注意事项 2：胆固醇溶液需保温 (>37°C) 以保持流动性。应及时转移胆固醇溶液，避免冷却。

2. 按照说明制备脂质混合物溶液。每毫升脂质混合物添加以下物质：572 μL 10mg/mL SM-102 (HY-134541)、240 μL 10mg/mL 胆固醇 (HY-N0322)、127 μL 10mg/mL DSPC (HY-W040193) 和 61 μL DMG-PEG 2000 (HY-112764)。充分混合溶液以获得澄清溶液。此混合物含有 10 mg 总脂质。

注意事项 3：脂质和比例的选择可以根据需要进行调整，这将影响 LNP 特性 (如大小、多分散性和效率) 以及所需的 mRNA 量。

B. mRNA 制备

1. 用 100 mM pH 值为 5 的醋酸钠缓冲液制备 166.7 μg/mL mRNA 溶液。

注意事项 4：脂质：mRNA 重量比影响包封效率。可制备其他重量比作为替代配方，用户应进行相应调整。

C. 混合

实现溶液快速混合的常用方法有三种：移液器混合法、涡旋混合法和微流体混合法。所有这些混合方法都可用于各种应用。

值得注意的是，移液器混合法和涡旋混合法可能会产生更多异质性 LNP，包封效率较低，并且容易产生变异。微流体装置能够以高度可控、可重复的方式快速混合，从而实现均质 LNP 和高包封效率。在这些装置中，乙醇脂质混合物和水溶液在单独的流中快速混合。当两股流混合时形成 LNP，然后收集到单个收集管中。

1. 移液器混合方法：

1.1. 吸取 3 mL mRNA 溶液，快速加入 1 mL 脂质混合物溶液中 (一般采用 1:3 的乙醇脂质混合物与水性缓冲液比例)。快速上下移液 20-30 秒。

1.2. 将所得溶液在室温下孵育最多 15 分钟。

1.3. 混合后，将LNPs用 PBS (pH 7.4) 透析 2 小时，用 0.2 μm 过滤器无菌过滤，并在 4°C 下储存。

2. 涡旋混合法：

1.1. 在涡旋混合器上以中等速度涡旋 3 mL mRNA 溶液。然后，快速将 1 mL 脂质混合物溶液加入涡旋溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂质混合物与水性缓冲液的比例）。继续涡旋所得分散液 20-30 秒。

1.2. 将所得溶液在室温下孵育最多 15 分钟。

1.3. 混合后，将 LNPs 用 PBS (pH 7.4) 透析 2 小时，用 0.2 μm 过滤器无菌过滤，并在 4°C 下储存。

3. 微流体混合方法：

1.1 将 3 mL mRNA 缓冲液与1 mL 脂质混合物溶液在微流控装置中以12 mL/min 的总流速混合 (一般采用 1:3 的乙醇脂质混合物与水性缓冲液的比例）。

注意事项 5：可以改变流量比和总流量等参数来微调 LNP。

1.2. 混合后，将 LNPs 用 PBS (pH 7.4) 透析 2 小时，用 0.2 μm 过滤器无菌过滤，并在 4°C下储存。

Reference

1. Curr Issues Mol Biol. 2022 Oct 19;44(10):5013-5027.

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

2000 (Average)

(C₂H₄O)nC₃₂H₆₂O₅

160743-62-4

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

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• [1]. Tianqi Nie, et al. Surface Coating Approach to Overcome Mucosal Entrapment of DNA Nanoparticles for Oral Gene Delivery of Glucagon-like Peptide 1.ACS Appl Mater Interfaces. 2019 Aug 21;11(33):29593-29603.  [Content Brief]