Phospho-NF-κB p65 (Ser529) 抗体 (YA170)

目录号: HY-P80470: Data Sheet SDS COA 抗体使用指南
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Phospho-NF-κB p65 (Ser529) Antibody (YA170) 是一个兔来源、无偶联标记、抗磷酸化 NF-κB p65 (Ser529) 的 IgG 单克隆抗体。

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•ACS Chem Biol. 2025 Jul 18;20(7):1646-1659. [Abstract]

WB: 蛋白质免疫印迹;
IHC-P: 石蜡切片样本的免疫组织化学;
IHC-F: 冰冻切片样本的免疫组织化学;
ICC/IF: 细胞免疫荧光;
IF-Tissue: 组织免疫荧光;
mIHC: 多重荧光免疫组化;
IP: 免疫沉淀;
ChIP: 染色质免疫沉淀;
FC: 流式细胞术;
ELISA: 酶联免疫吸附试验

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描述

Phospho-NF-κB p65 (Ser529) Antibody (YA170) is a Rabbit-derived and non-conjugated IgG monoclonal antibody, targeting to Phospho-NF-κB p65 (Ser529).

宿主

Rabbit

克隆性

Recombinant, Monoclonal

分子量

Predicted band size: 60 kDa;

Observed band size: 65 kDa

请注意：因蛋白存在修饰或聚体等情况，以实测为准，预测仅为参考。

反应种属

Human

蛋白数据库

Q04206

基因 ID

5970 [NCBI]

免疫原

Synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Ser529 of Human NF-kB p65.The exact sequence is proprietary to MCE.

应用 & 推荐
稀释比例

应用	稀释比
WB WB: 蛋白质免疫印迹	1:500-1:1000
FC FC: 流式细胞术	1:50-1:100
IP IP: 免疫沉淀	Use at an assay dependent concentration.
IHC-P IHC-P: 石蜡切片样本的免疫组织化学	1:50

敏感性	Endogenous	纯度	Protein A affinity purified.
偶联	Non-conjugated	修饰	Phosphorylated
同型	IgG

性状

液体

组分

Supplied in 1*TBS (pH7.4), 0.05% BSA and 40% Glycerol. Preservative: 0.05% Sodium Azide.

保存条件 & 期限

Stored at -20°C for 1 year. Avoid repeated freeze / thaw cycles.

运输条件

Shipping with blue ice.

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Western blot analysis of extracts from HEK293(lane 2(20μg) and HEK293(lane 3(40ug) using Phospho-NF-B p65(HY-P80470 Rabbit mAb. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% non-fat milk in TBST for 2 hour at room temperature. The primary antibody (1/1000) and Loading control antibody (Beta Actin, HY-P80438, 1/10000) was used in 5% non-fat milk in TBST at 4°C overnight. Goat Anti-Mouse/Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody (1/10000) was used for 1 hour at room temperature.

背景

功能：NF-κB 是一种多效性转录因子，几乎存在于所有细胞类型中，它是一系列信号转导事件的终点，这些事件由多种刺激启动，涉及炎症、免疫、分化、细胞生长、肿瘤发生和细胞凋亡等众多生物学过程。NF-κB 是由含有 Rel 样结构域的蛋白 RELA/p65、RELB、NFKB1/p105、NFKB1/p50、REL 和 NFKB2/p52 组成的同源或异源二聚体复合物。其中，异源二聚体 RELA-NFKB1 复合物似乎最为丰富。这些二聚体结合于靶基因 DNA 上的κB 结合位点，不同的二聚体对不同的κB 结合位点具有不同的偏好性，并能以不同的亲和力和特异性结合。不同的二聚体组合分别作为转录激活因子或抑制因子发挥作用。例如，NF-κB 异二聚体 RELA-NFKB1 和 RELA-REL 复合物作为转录激活因子发挥作用。NF-κB 的活性受多种机制调控，包括翻译后修饰、亚细胞区室化以及与其他辅助因子或共抑制因子的相互作用。NF-κB 复合物以非活性状态存在于细胞质中，并与 NF-κB 抑制因子 (I-κB) 家族成员结合。在传统的激活途径中，I-κB 在不同激活因子的刺激下被 I-κB 激酶 (IKK) 磷酸化，随后被降解，从而释放出活性 NF-κB 复合物并转位至细胞核。I-κB 通过与 RELA 相互作用，将 NF-κB 滞留在细胞质中，从而发挥抑制作用。 RELA 具有较弱的 DNA 结合位点，这可能直接促进 NF-κB 复合物中的 DNA 结合。除了作为直接转录激活因子外，它还能调节启动子对转录因子的可及性，从而间接调控基因表达。RELA 通过与 DDX1 结合而与 NF-κB 启动子区域的染色质结合。RELA 对 T 细胞中细胞因子基因的表达至关重要 (PubMed:15790681)。NF-κB 同源二聚体 RELA-RELA 复合物似乎参与了侵袭素介导的 IL-8 表达激活。它是 SARS-CoV-2 感染期间调控 IFN 反应的关键转录因子 (PubMed:33440148)。

亚细胞定位：细胞核；细胞质

异构体 & 翻译后修饰：Q04206 有 4 种异构体：Q04206-1：60219 Da (预测值)；Q04206-2：58807 Da (预测值)；Q04206-3：59068 Da (预测值)；Q04206-4：59910 Da (预测值)。
Q04206 可被 RNF182 泛素化，导致其被蛋白酶体降解 (PubMed:31432514)。降解是终止 NF-κB 反应所必需的。Q04206 还可通过 Lys-29 连接的泛素进行多聚泛素化，导致其被溶酶体降解 (PubMed:21518757)；此外，Q04206 还可被 SETD6 在 Lys-310 位点进行单甲基化 (PubMed:21515635)。 Lys-310 的单甲基化可被 EHMT1 的 ANK 重复序列识别，并促进靶基因处抑制性染色质的形成，从而导致 NF-κB 转录因子活性下调。Ser-311 的磷酸化破坏了与 EHMT1 的相互作用，但并不阻止 Lys-310 的单甲基化，从而解除靶基因的抑制 (基于序列相似性)；Ser-311 的磷酸化破坏了与 EHMT1 的相互作用，并促进了转录因子活性 (基于序列相似性)。Ser-536 的磷酸化刺激了 Lys-310 的乙酰化以及与 CBP 的相互作用；磷酸化和乙酰化形式的蛋白均表现出增强的转录活性。 RPS6KA4 和 RPS6KA5 对 Ser-276 位点的磷酸化促进其转录激活和转录活性；单纯疱疹病毒 1 型/HHV-1 对 Ser-75 位点的磷酸化抑制 NF-κB 的激活；该蛋白可逆乙酰化；乙酰化似乎由 CBP 介导，去乙酰化由 HDAC3 和 SIRT2 介导。Lys-122 位点的乙酰化增强 DNA 结合并削弱与 NFKBIA 的结合。Lys-310 位点的乙酰化是完全转录活性所必需的，且不影响 DNA 结合和与 NFKBIA 的结合。Lys-310 位点的乙酰化促进与 BRD4 的相互作用。乙酰化还可以降低 DNA 结合并导致核输出。与 BRMS1 的相互作用促进 Lys-310 位点的去乙酰化。 Lys-310 被 SIRT2 去乙酰化；Cys-38 的 S-亚硝基化使酶活性失活；Cys-38 的硫氢化通过促进与 RPS3 的相互作用并激活转录因子活性来介导抗凋亡活性；PIAS3 介导的 SUMO 化负调控 DNA 结合的活化 NF-κB；在 CPEN1 介导的保守 N 端区域内发生蛋白水解切割，该区域对于与 DNA 的碱基特异性接触至关重要，因此抑制 NF-κB 转录活性 (PubMed:18212740)

亚基：NF-κB p65-p50 复合物的组成成分。NF-κB p65-c-Rel 复合物的组成成分。同源二聚体；NF-κB p65-p65 复合物的组成成分。NF-κB p65-p52 复合物的组成成分。可能与 ETHE1 相互作用。结合 TLE5 和 TLE1。与 TP53BP2 相互作用。结合并被 RPS6KA4 或 RPS6KA5 的活化形式磷酸化。与 ING4 相互作用，这种相互作用可能是间接的。与 CARM1、USP48 和 UNC5CL 相互作用。与 IRAK1BP1 相互作用 (基于相似性)。与 NFKBID 相互作用 (基于相似性)。与 NFKBIA 相互作用 (PubMed:1493333)。与 GSK3B 相互作用。与 NFKBIB 相互作用 (基于相似性)。与 NFKBIE 相互作用。与 NFKBIZ 相互作用。与 EHMT1 相互作用 (通过 ANK 重复序列)(PubMed:21515635)。至少包含 CHUK、IKBKB、NFKBIA、RELA、ELP1 和 MAP3K14 的 70-90 kDa 复合物的组成部分。与 HDAC3 相互作用；HDAC3 介导 RELA 的去乙酰化。与 HDAC1 相互作用；该相互作用需要非磷酸化的 RELA。与 CBP 相互作用；该相互作用需要磷酸化的 RELA。与 PIN1 相互作用 (在“Thr-254”位点磷酸化)；该相互作用抑制 p65 与 NFKBIA 的结合。与 SOCS1 相互作用。与 UXT 相互作用。与 MTDH 和 PHF11 相互作用。与 ARRB2 相互作用。与磷酸化的 NFKBIA 相互作用，这种相互作用是直接的；磷酸化的 NFKBIA 是缺乏 CUL1 的 SCF (BTRC) 样复合物的一部分。与 RNF25 相互作用。通过 C 端与 DDX1 相互作用。与 UFL1 和 COMMD1 相互作用。与 BRMS1 相互作用；这促进 Lys-310 的去乙酰化。与 NOTCH2 相互作用 (基于相似性)。直接与 MEN1 相互作用；这种相互作用抑制 NFKB 介导的转录激活。与 AKIP1 相互作用，后者促进 RELA 的磷酸化和核内滞留。通过 RHD 与 GFI1 相互作用；在细菌脂多糖 (LPS) 刺激后，这种相互作用通过干扰其与靶基因启动子 DNA 的结合活性来抑制转录活性。在 Lys-310 位点乙酰化时与 BRD4 相互作用；导致 NF-κB 通路激活。与 MEFV 相互作用。与 CLOCK 相互作用 (基于相似性)。通过 N 端与 CPEN1 相互作用；这种相互作用诱导 p65/RELA 亚基的蛋白水解切割并抑制 NF-κB 转录活性 (PubMed:18212740)。与 FOXP3 相互作用。与 CDK5RAP3 相互作用；刺激 RELA 与 HDAC1、HDAC2 和 HDAC3 的相互作用，从而抑制 NF-κB 转录活性 (PubMed:17785205)。与 DHX9 相互作用；这种相互作用是直接的，并激活 NF-κB 介导的转录 (PubMed:15355351)。与 LRRC25 相互作用 (PubMed:29044191)。与 TBX21 相互作用 (基于相似性)。与 KAT2A 相互作用 (基于相似性)。与 ZBTB7A 相互作用；参与 RELA 对靶基因启动子可及性的调控 (PubMed:29813070)。直接与 DDX3X 相互作用；这种相互作用可能将 RELA 滞留在细胞质中，从而抑制 TNF 激活信号诱导的核内重定位 (PubMed:27736973)。与 PHF2 相互作用 (基于相似性)。与 MKRN2 相互作用；这种相互作用导致 MKRN2 发生多聚泛素化并被蛋白酶体降解 (基于相似性)。与 ECSIT 相互作用 (PubMed:25355951)。与 RAB28 相互作用；这种相互作用促进 RELA 从细胞质转运至细胞核 (基于相似性)。

RRID

AB_3102544

反应种属数据库

Entrez Gene: 5970 Human

SwissProt: Q04206 Human

OMIM: 618287 Human

研究领域

Cell Biology

中文名

Phospho-NF-κB p65 (Ser529) 抗体

文件资料

Select Batch:

Data Sheet (444 KB) SDS (251 KB)

COA (194 KB)

抗体使用指南 (1083 KB)

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Help & FAQs

Do most proteins show cross-species activity?
Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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