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Cell Counting Kit-8 

Cat. No.: HY-K0301
Manual COA SDS 技术支持

Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒或 CCK8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的快速、高灵敏度试剂盒。

Cell Counting Kit-8

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MCE 顾客使用本产品发表的 2852 篇科研文献

Proliferation Assay
Cell Viability Assay
MTT assay

    purchased from MCE. Usage Cited in: Cell Death Dis. 2018 Feb 7;9(2):177.  [Abstract]

    CCK8 assay. Proliferation of CAR T cells during expansion in response to repetitive stimulation with EGFR antigen.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Oncol Lett. 2018 Apr;15(4):4129-4136.  [Abstract]

    The effect of TRPM8 knockdown on (A) LNCaP and (B) PC3 cells proliferation is measured by CCK 8 assay.

    purchased from MCE. Usage Cited in: J Mol Liq. 2023 Mar 2.

    CCK-8 (10 μM; 24 h) is used to detect the survival rate of L929 cells after treatment with different concentrations of DESs.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Signal Transduct Target Ther. 2024 Mar 8;9(1):63.  [Abstract]

    CCK8 (1-2 h) assay-based detection of IC50 of gemcitabine in ICC cells.

    purchased from MCE. Usage Cited in: J Nanobiotechnology. 2022 Jul 14;20(1):324.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μM; 1-2 h) assay was used to assess the effect of huc-MSCs-derived exosomes (1, 10, 50, 100 µg/ml) on BV2 cell viability, and ns indicates no significance.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Adv Mater. 2025 Jan 13:e2413728.  [Abstract]

    CCK-8 (2 h). Absorption at 450 nm in MTT assay of different incubation groups after12, 24, and 48 hours of incubation.

    purchased from MCE. Usage Cited in: ACS Nano. 2024 Nov 26;18(47):32578-32588.  [Abstract]

    CCK-8 staining with ECs and ASMCs.

    purchased from MCE. Usage Cited in: ACS Nano. 2024 Oct 16.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μL/well; 50 min). (B,C) Quantitative determination of neuroprotection in the SH-SY5Y cell model for neuronal damage induced by Aβ1−42 oligomers.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Nature. 2024 Sep 25.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μL/well; incubated at 37°C for 1-4 hours). CCK-8 assay is used to measure cell counts of PC9 Del19 lung cancer cells and normal cells NHBE (normal bronchial epithelial cells), 16HBE (normal bronchial epithelial cells), BEAS-2B (normal bronchial epithelial cells), MCF10A (normal breast epithelial cells), IMR-90 (lung fibroblasts), primary B cells (lymphocytes), and primary CD8+ T cells (lymphocytes).

    purchased from MCE. Usage Cited in: Ann Rheum Dis. 2024 Sep 4:ard-2024-225565.  [Abstract]

    CCK-8 (10 µL/well). Viability of RA-FLSs after daily treatment with phosphate buffered saline (PBS) or 400 nM negative control (NC), SAPT4 or SAPT8 for 5 days as determined by Cell Counting Kit-8 assays.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Cell Metab. 2023 Apr 12;S1550-4131(23)00095-5.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μL/well; 2 h). CCK-8 assays were carried out to assess the effect of TK1 on HCC cell proliferation. n = 3 independent biological replicates.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Adv Funct Mater. 2024 Jul 16.

    CCK-8 (10 μL/well; 2 h). The cytotoxicity of OMV-CD47/GPC3 on Hepa1-6, HK-2, and L-02 cells.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Nano Energy. 2024 Sep.

    CCK-8 (10 μL/well; 2 h). Cell viability of L929 cultured in the serum-supplemented MEM basic containing UPN extract or not after 1, 2 and, 3 days (n = 3).

    purchased from MCE. Usage Cited in: Nucleic Acids Res. 2023 Oct 23:gkad900.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μL/well; 1 h). Cell Counting Kit-8 (CCK-8) cytotoxicity assays on (A) HEK293T cells, (B) HGC-27 cells and (C) HeLa cells. Cells were incubated with 0-1000 nM of L-Apt12-6 for 48 h, and then were incubated with CCK-8 for 1 h to evaluate cytotoxicity.

    purchased from MCE. Usage Cited in: Drug Resist Updat. 2024 Mar:73:101052.

    CCK-8 (10 μL/well; 1-4 h). HCC cells, divided into DUSP4-vehicle and DUSP4-OE (overexpression) groups, were exposed to different concentrations of sorafenib (0, 2.5, 5, 10, 15, and 20 µM) for 24 h, followed by assessment of cell viability via the CCK8 assay.

    purchased from MCE. Usage Cited in: J Extracell Vesicles. 2024 Jul;13(7):e12473.  [Abstract]

    CCK-8 (10 μL/well; 1 h). The HUVECs proliferation in each group determined by CCK‐8 assay (n = 3/group).

    MCE 生物验证

    Proliferation Assay
    MTT assay
    Cell Viability Assay

      Cell Counting Kit-8 purchased from MCE. Usage Cited in: Cell Metab. 2023 Apr 12;S1550-4131(23)00095-5.  [Abstract]

      Customer Validation
      CCK-8 (10 μL/well; 2 h). CCK-8 assays were carried out to assess the effect of TK1 on HCC cell proliferation. n = 3 independent biological replicates.

      Cell Counting Kit-8 purchased from MCE. Usage Cited in: Adv Mater. 2025 Jan 13:e2413728.  [Abstract]

      Customer Validation
      CCK-8 (2 h). Absorption at 450 nm in MTT assay of different incubation groups after12, 24, and 48 hours of incubation.

      Cell Counting Kit-8 purchased from MCE. Usage Cited in: Ann Rheum Dis. 2024 Sep 4:ard-2024-225565.  [Abstract]

      Customer Validation
      CCK-8 (10 µL/well). Viability of RA-FLSs after daily treatment with phosphate buffered saline (PBS) or 400 nM negative control (NC), SAPT4 or SAPT8 for 5 days as determined by Cell Counting Kit-8 assays.

      Cell Counting Kit-8 purchased from MCE. Usage Cited in: Adv Funct Mater. 2024 Jul 16.

      Customer Validation
      CCK-8 (10 μL/well; 2 h). The cytotoxicity of OMV-CD47/GPC3 on Hepa1-6, HK-2, and L-02 cells.

      • CCK-8实验原理

      • CCK-8优势

      • CCK-8实验步骤

      • 储存方式

      • 实验注意事项

      • 文件

      CCK-8实验原理

      Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan。



      WST-8 和 WST-8 formazan 的结构式


      细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系。



      CCK-8 的原理图
      CCK-8优势

      WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原 生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。第四，WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
      CCK-8实验步骤

      试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
      1. 制作标准曲线
      a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；
      b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔；
      c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

      2. 细胞活性检测
      a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
      b. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ；
      c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
      d. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

      3. 细胞增殖-毒性检测
      a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
      b. 向培养板加入不同浓度的待测药物；
      c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；
      d. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ；
      e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
      f. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

      4. 计算公式
      细胞存活率 =[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
      抑制率 =[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
      As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ；
      Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ；
      Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。

      CCK-8 试剂盒检测细胞活性


      注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。
      储存方式
      4°C，2年 长期保存，建议避光
      实验注意事项

      1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8 的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。
      2. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
      3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
      4. 加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是 10 mM 的话，将会 100% 抑制。
      5. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
      6. 本产品可以检测，但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。
      7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。
      8. 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。
      9. 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。
      10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) ：
      (a). 在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱内。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。
      注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。
      11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
      12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
      包装
      Cat.No. Product Name Package
      HY-K0301-1 mL Cell Counting Kit-8 1 mL
      HY-K0301-5 mL Cell Counting Kit-8 5 mL
      HY-K0301-30 mL Cell Counting Kit-8 5 mL × 6
      HY-K0301-120 mL Cell Counting Kit-8 5 mL × 24
      文件资料

      Manual (449 KB) SDS (159 KB)
      Help & FAQs
      • Do most proteins show cross-species activity?

        Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.

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