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Cell Counting Kit-8 

Cat. No.: HY-K0301
Manual SDS

Cell Counting Kit-8,简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒,是一种基于WST-8而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的快速、高灵敏度试剂盒。

Cell Counting Kit-8

1.  客户无需承担相应的运输费用。

2.  同一机构(单位)同一产品试用装仅限申领一次,同一机构(单位)一年内

     可免费申领三个不同产品的试用装。

3.  试用装只面向终端客户

规格 价格 是否有货 数量
Free Sample (1 mL)   Apply now  
1 mL (100 T) ¥210 In-stock
5 mL (500 T) ¥680 In-stock
30 mL (3000 T) ¥2400 In-stock
120 mL (12000 T) ¥7680 In-stock

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Customer Validation

  • Cell Counting Kit-8 Figure

    Cell line: HEK293

    Medium: DMEM, 10% FBS

    Incubation: 37°C, 5% CO2, 2 hours

    R2=0.9998

  • Cell Counting Kit-8 Figure

    Cell line: U87, SK-HEP1

    Medium: DMEM, 10% FBS

    Chemicals: 200 μM CDDP (DDP)

    Incubation: 37°C, 5% CO2, 2 hours

  • CCK-8实验原理

  • CCK-8优势

  • 客户验证

  • CCK-8实验步骤

  • 储存方式

  • 实验注意事项

  • 文件

CCK-8实验原理

Cell Counting Kit-8,简称 CCK-8 试剂盒,是一种基于 WST-8 而广泛应用于 细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。 CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分。WST-8 在 电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色 的formazan。



WST-8 和 WST-8 formazan 的结构式


细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大, 则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数 目呈线性关系 。



CCK-8 的原理图


CCK-8优势

WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品,和 MTT 或其它 MTT 类似产品,如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。第一,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原 生成的 formazan 不是水溶性的,需要有特定的溶剂来溶解;而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。第 二,WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。 第三,WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定,使实验结果更可靠。第四,WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽,灵敏度更高,并且更加稳定。 WST-8 对细胞无明显毒性。加入 CCK-8 溶液显色后,可以在不同时间反复 用酶标仪读板,检测时间更加灵活,便于确定最佳测定时间。


客户验证
CCK-8实验步骤

试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物 等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
1. 制作标准曲线
a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞;
b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 5-7 个细 胞浓度梯度,每组 4-6 个复孔;
c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁,然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD 值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。 使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

2. 细胞活性检测
a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ,将培养板放在培养箱中预培养 24 小时;
b. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ;
c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;
d. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

3. 细胞增殖-毒性检测
a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL/孔) ,将培养板放在培养箱中预培养 24 小时;
b. 向培养板加入不同浓度的待测药物;
c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间;
d. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡);
e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时;
f. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

4. 计算公式
细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ;
Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物) ;
Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物) 。

CCK-8 试剂盒检测细胞活性


注:如果待测药物有氧化性或还原性,可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基,去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培 养基,直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

储存方式
4°C保存一年;-20°C保存2年;长期保存,建议避光
实验注意事项

1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时,但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度,根据细胞种类而定,需要摸索条件,CCK-8 的最佳反应时 间以具体显色的最佳时间为准。
2. 使用 96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问 题。一方面,由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的 PBS 、水或培养液;另一方面,可以把 96 孔板置 于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂 (例如一些抗氧 化剂) 会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。
4. 加入药物中如含有金属,对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化 亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应,使灵敏度降 低。如果终浓度是 10 mM 的话,将会 100% 抑制。
5. 培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过 扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
6. 本产品可以检测 ,但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液 中加入 10 μL CCK-8 溶液,并培养 1-4 小时或过夜。
7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶 液颜色不断加深,OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。
8. 要测定细胞的具体数量,建议同时做标准曲线。
9. 建议采用多通道移液器,以减小平行孔间的差异。
10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) :
(a). 在显色反应后,将培养板放置 4°C 冰箱内。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。
注意:反应停止后,应在 24 小时内测定。
11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不 得用于食品或药品。
12. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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